Phénotypage métabolique
SE labmaster
EchoMRI-700
Enceinte Thermostatisée
Caméra infra-rouge FLIR E60
Roues d’activité pour souris
Bombe calorimétrique
Cobas C111
Pression Artériel
TSE labmaster: Local D02.2153a
Equipement pour 16 cages souris et 12 cages rats.
Le labmaster assure les mesures suivantes :
- Paramètres calorimétriques (consommation O2, production CO2, coefficient respiratoire (RER), dissipation d’énergie, température des cages)
- Prise de boisson
- Prise de nourriture
- Activité locomotrice (exploration, mouvements fins)
- Evolution de la masse corporelle
PROCEDURES D'UTILISATION DU LABMASTER
L'expérience se déroule sur une semaine. L'utilisateur amène les animaux le Mercredi matin. Ils seront installés dans la machine et surveillés jusqu'au Mardi suivant pour la période d'habituation. Les données de l'expérience proprement dite seront recueillies du mardi matin au jeudi matin. Le Jeudi, les animaux sont rendus à l’utilisateur qui doit obligatoirement mesurer la composition corporelle par EchoMRI (nécessaire pour expression des résultats).
Les résultats sont d'abord analysés par la plateforme, afin de s'assurer que les paramètres obtenus sont corrects.
L'interprétation des résultats, la détection d'éventuelles aberrations, l'analyse statistique (ANCOVA), les représentations graphiques des données et la rédaction des demandes d'autorisation d'expérimentation animale peuvent être très exceptionnellement proposées. Pour plus de détails, contacter le Prof. Roberto Coppari
A LA CHARGE DE L'UTILISATEUR
Amener les animaux, ainsi que leur nourriture.
Réservation du Labmaster :
Contacter Dr Franck Bontems pour déterminer le planning de l'expérience (disponibilité de la machine, ainsi que les personnes en charge des aspects pratiques de son fonctionnement).
Règles d'utilisation de Labmaster
• Le Labmaster peut être réservé pour une ou plusieurs semaines (du mercredi au mercredi) selon la disponibilité;
• Les utilisateurs seront facturés au plein tarif au moment de la réservation (1500 CHF/semaine);
• Politique d'annulation: Si les utilisateurs annulent 2 semaines avant le début de l'expérience, ils seront remboursés.
• Dans le cas où quelqu'un d'autre serait intéressé à réserver Labmaster au moment où il a déjà été réservé, cette personne devrait en informer la plateforme et il sera contacté dès que le Labmaster sera disponible (en cas d'annulation).
• Mercredi matin: les utilisateurs apportent leurs souris (Maximum 16 souris);
• Les utilisateurs doivent informer la pateformes des 5 points suivants:
1) Nombre de souris et de groupes (témoins, KO, mâles, femelles, aliments spéciaux, boissons spéciales, etc...);
2) nombre de cages d'animaux amenées au début de l'expérience;
3) Les utilisateurs doivent informer La plateforme si ils prévoient d'interagir pendant l'expérience (restriction alimentaire, injection, changements de nourriture, contrôle du poids corporel, etc...);
4) Quelle est la température de l'expérience (6 ° C à 35 ° C)?
5) Souhaitez-vous tester une préférence de nourriture ou de boisson?
STATUT SANITAIRE DES ANIMAUX
L’utilisation d’animaux provenant d’animaleries hors CMU doit au préalable avoir été approuvée par le service vétérinaire de la Faculté de Médecine : un certificat sanitaire récent de l’animalerie d’origine, avec historique sur 18 mois doit être envoyé au support vétérinaire (), préalablement à tout import d’animaux.
Cette étape doit être réalisée à l’initiation du projet, pour vérifier la faisabilité de l’import des animaux (certains animaux seront refusés si leur statut sanitaire n'est pas suffisant).
Selon l’animalerie de provenance, une période de quarantaine de plusieurs semaines est à prévoir, avant de pouvoir utiliser la plateforme.
Tout animal présentant des problèmes (blessure, infection, comportement anormal) ne pourra pas être admis dans le Labmaster, afin de prévenir au mieux de potentiels problèmes pour d'autres utilisateurs et afin de tenir compte du fait qu'il est aberrant d'étudier un animal en mauvais état de santé.
Conseil :
Afin d'obtenir les résultats les plus fiables possible et statistiquement intéressant il est conseillé d’avoir si possible 2 groupes d'animaux pour les 16 cages de souris du Labmaster (n=8 pour chacun des deux groupes).
Il n'est encore jamais arrivé d'avoir des résultats significativement différents avec 1 seul expérience de plus de 4 groupes d'animaux différents (n=4 animaux par groupes)
- 4 groupes avec n=4 est limite pour obtenir un résultat satisfaisant (mais il sera généralement nécessaire de reproduire l’expérience)
- Même en reproduisant l’expérience, n=3 animaux par groupe, est l’extrême limite pour effectuer une expérience.
En dessous de 3 animaux par groupes dans chaque phénotype (n=2 ou n=1, même en reproduisant l'expérience plusieurs fois) les résultats seront décevant et non reproductible . Il ne sera pas possible d'effectuer une analyse correcte
avec, par exemple, 8 animaux par groupe. Vous pouvez apporter 9 animaux pour remplacer 1 éventuel outlier au début de l'expérience (animal qui ne mange pas ou ne boit pas correctement).
- animaux de masse homogène (variation <15%)
- les expérimentations caractérisant le mouvement (proche du comportement) tel que :
roue entrainement volontaire
déplacement dans la cages
sont à effectuer avec n=6 minimum (donc seulement 2 groupes ou 3 groupes maximum)
Appareils pour tests physiques
Dépistage de drogues (évaluation des effets de produits potentiellement toxiques, médicaments ou vaccins), maladies neuromusculaires, maladie de Parkinson, maladie de Huntington, étude sur le vieillissement ou lors de lésion cérébrale
Endurance, résistance à l'effort...
Test d'agrippement
Le test d'agrippement évalue la fonction neuromusculaire chez le rongeur
Ce test étant souvent dépendant aussi de l'opérateur il est réalisé par la plateforme.
Rotarod
Test de performance afin de quantifier la capacité de l'animal à se maintenir sur une tige horizontale en rotation.
Mesure le temps de maintien et/ou l'endurance et/ou coordination
Ce test étant souvent dépendant aussi de l'opérateur il est réalisé par la plateforme.
Deux types de Tapis roulants.
1) Tapis roulants calorimétrique.
Ces 4 tapis roulants sont connectés au Labmaster afin d'obtenir les paramètres calorimétriques durant un exercice dans le cadre d' expériences étudiant le métabolisme ou les propriétés musculaire.
3 phases sont nécéssaire :
- Jour 1 Habituation 5 min 0m/sec inclinaison 0°
5 min 0m/sec inclinaison 10°
5 min 0.15 m/sec inclinaison 10°
- Jour 2 Habituation 5 min 0m/sec inclinaison 0°
5 min 0m/sec inclinaison 10°
5 min 0.15 m/sec inclinaison 10°
- Jour 3 Enregistrement 5 min 0m/sec inclinaison 0°
5 min 0m/sec inclinaison 10°
5 min 0.08 m/sec inclinaison 10°
5 min 0.15 m/sec inclinaison 10°
5 min 0.20 m/sec inclinaison 10°
5 min 0.25 m/sec inclinaison 10°
...
Un nouveau protocole semble être moins stressant pour les animaux :
Graded Maximal Exercise Testing to Assess Mouse Cardio-Metabolic PhenotypesJennifer M. Petrosino (2016).Le nouveau protocole est lui décrit en 4 phases :
- Jour 1 : Habituation
3 min 0m/sec inclinaison 0°
5 min 0.1m/sec inclinaison 0°
2 min 0.15m/sec inclinaison 0°
2 min 0.2 m/sec inclinaison 0°
- Jour 2 : Habituation
3 min 0m/sec inclinaison 0°
5 min 0.1m/sec inclinaison 0°
2 min 0.15m/sec inclinaison 0°
2 min 0.2 m/sec inclinaison 0°
- Jour 3 : Habituation
3 min 0m/sec inclinaison 0°
5 min 0.1m/sec inclinaison 0°
2 min 0.15m/sec inclinaison 0°
2 min 0.2 m/sec inclinaison 0°
- Jour 4 : Enregistrement
3 min 0m/sec inclinaison 0°
2 min 0.1m/sec inclinaison 0°
2 min 0.15m/sec inclinaison 5°
2 min 0.2 m/sec inclinaison 10°
2 min 0.25 m/sec inclinaison 15°
1 min 0.3 m/sec inclinaison 15°
1 min 0.35 m/sec inclinaison 15°
1 min 0.383 m/sec inclinaison 15°
1 min 0.40 m/sec inclinaison 15°
...
Ce nouveau protocole d’exercice est de plus en plus utilisé car il se rapproche des tests effectués chez l’humain.
-Avec une durée supérieure à 6 min
-Mais surtout, une durée généralement inférieure à 12 min, comparé au protocole précédant qui peut durer jusqu’à 45 min.
Une augmentation progressive de la vitesse concomitante avec une augmentation de l’inclinaison permettant de fournir des données plus reproductibles sur les performances et ainsi réduire le nombre d’animaux.
Lien:
2) Tapis roulants ouvert.
Ces tapis roulants sont connectés a un ordinateur afin d'obtenir les paramètres et les données enregistrées sans calorimétrie.
Lien vidéo: Assessment of Murine Exercise Endurance Without the Use of a Shock Grid: An Alternative to Forced Exercise
EchoMRI-700; Local C05.1741a Tél : 022 379 52 16
Mesure de la composition corporelle par EchoMRI-700™ chez le rat et la souris éveillés
Détermination de la masse adipeuse, de la masse maigre, des liquides libres (urine) et de l’eau totale de l’organisme.
Mesures réalisées en 1 à 2 minutes chez le rat et en 2 à 3 minutes chez la souris, sans anesthésie ou sédation.
Lien:
Enceinte thermostatisée Local D02.1953a
L'incubateur peut contenir maximum 32 cages de souris (21x32cm), 24 cages avec filtre (20X40cm), 16 petites cages de rats (43x30cm) ou 8 grandes cages de rats (34x56cm), au maximum. Respecter le nombre d'animaux autorisé par cage.
Afin de garantir le bon fonctionnement de l'enceinte climatique, le nombre de cages maximum doit être respecté.
La température de l’enceinte peut être fixée à une température donnée (6 à 35 degrés Celsius). L’humidité peut être modifiée (55% at ± 15%).
Finalement, les cycles circadiens de jour-nuit peuvent être déterminés par l’utilisateur (intervalle minimum de 30 minutes).
Pour les détails pratiques (ex: changement des cages pendant une expérience), contacter un coordinateur.
Pour la demande de matériel (cages, nourriture....) demander minimum 1 semaine à l'avance.
Comme pour le Labmaster, Politique d'annulation: Si les utilisateurs annulent 2 semaines avant le début de l'expérience, ils seront remboursés.
RESERVATION (3 mois maximum)
Contacter Dr. Franck Bontems
Lien:
Caméra infra-rouge FLIR E60 ; Local C05.1550a Tél : 022 379 52 16
Caractéristiques :
caméra infra-rouge permettant de mesurer la température superficielle d'un animal
Gamme de détection : de - 20 à 650 degrés Celsius
Détection : 320 x 240 pixels
Caméra vidéo avec lampe et laser : 3.1 MP vidéo, lampe LED et pointeur laser
Zoom digital : 4x en continu
Exemples d'utilisation :
Lien :
Roues d’activité pour souris couloir D02
Il s’agit de roues (10.15 cm de diamètre) pour installation dans des cages de taille classique couvertes par une grille. L’activité spontanée des animaux est mesurée en continu. Ceci se fait grâce à un programme conçu pour PC qui nécessite un câble sortant de la cage, ainsi qu’une interface USB externe.
RESERVATION
Contacter Dr. Franck Bontems / Tél : 022 379 52 48
Lien:
http://www.colinst.com/brief.php?id=47
Bombe Calorimétrique ; Local C05.1741a
La bombe calorimétrique est utilisée pour déterminer l'énergie calorimétrique d'un échantillon.
Les échantillons généralement testés sont des matières fécales ou des aliments provenant de laboratoires d'animaux. Si l'on note pour chaque animal, la masse d'aliments consommés ainsi que la masse de matières fécales produites, il est possible de calculer l'absorption d'énergie
Energie digestible (cal) = (Masse de nourriture (g) X Energie Calo. Nourriture (cal / g)) - (Masse de Matières fécales (g) X Energie Calo. Fèces (cal / g))
Note: D'autres types d'échantillons peuvent être analysés pour déterminer leurs valeurs énergétiques (tissus ...) contacter un coordinateur
RESERVATION
Contacter Dr. Franck Bontems /Tél : 022 379 52 16 pour déterminer le planning de l'expérience (disponibilité de la machine, aspects pratiques de son fonctionnement).
Recommandations pour les échantillons
Pour une mesure, un minimum de 0,25 g de Matières fécales séchées et mises en fine poudre sont nécessaire.
Prix par mesure: CHF 16.- (triplicat : CHF 48.-)
Cobas C111 ; Local C05.1741a
Le CobasC111 est destiné à l'analyse des échantillons (sang/sérum/plasma/urine)
Il permet le dosages des principaux analystes chez les animaux et/ou l'homme (voir tableau ci dessous).
RESERVATION
Contacter Dr. Franck Bontems /Tél : 022 379 52 16 pour déterminer le planning de l'expérience (disponibilité de la machine, aspects pratiques de son fonctionnement).
Information importante
Volume mort : 50ul par échantillions
Le COBAS est un appareil normalement utilisé pour l’analyse d’échantillons humains. Certaines analyses utilisent des anticorps contre des protéines humaines ; les résultats obtenus ne peuvent donc pas être garantis pour des dosages sur des échantillons provenant d'animaux de laboratoire.
Le système de mesures de pression CODA ™ a été conçu pour permettre une mesure précise de la pression artérielle chez les souris et les rats. La pression artérielle est mesurée dans la queue de la souris ou du rat à l'aide de capteurs d'enregistrement de la pression volumique (VPR) spécifiques. Le logiciel permet de visualiser en continu les données en temps réel.
L’habituation des animaux se fait sur une période de 3 à 4 jours, puis de mesures sur 4 à 5 jours maximum. Des groupes de 8 souris sont conseillés (même âge, même genre).
RESERVATION
Contacter Dr. Christelle Veyrat-Durebex.
Cages métabolique ; couloir D02.2052a
12 cages métaboliques sont disponibles et peuvent être utilisées par période de 24 heures. Elles permettent de séparer les urines et les fèces de 12 animaux simultanément, permettant ainsi différents types de mesures :
- Etude du phénotype.
- Evaluation calorimétrique des fèces (bombe calorimétrique).
- Volume/poids urine et fèces excrétées.
- Excrétion de protéines.
- Effet thérapeutique de médicaments.
- Etudes rénales fonctionnelles.
RESERVATION
Contacter Dr. Franck Bontems pour déterminer le planning de l'expérience (disponibilité et aspects pratiques)